Skripsi

Optimasi ekspresi rekombinan bst dna polimerase pada sistem ekspresi escherichia coli / Astadewi Ismadara

Abstrak
Bst DNA polimerase merupakan jenis DNA polimerase yang berasal dari Geobacillus stearothermophilus yang digunakan dalam analisa loop-mediated isothermal amplification (LAMP) untuk deteksi virus COVID-19. Saat ini di Indonesia Bst DNA polimerase didapatkan dengan mengimpor dari luar negeri sehingga harganya mahal dan riset mengenai Bst DNA polimerase di Indonesia masih jarang dilakukan. Oleh karena itu dalam penelitian ini dilakukan ekspresi gen Bst DNA polimerase yang berbasis gen sintetik menggunakan vektor ekspresi pD451-SR dengan Escherichia coli BL21 Star (DE3) sebagai sel inang. Ekspresi protein rekombinan dikontrol oleh promotor T7 sehingga kultur dikendalikan menggunakan Isoprophyl- szlig -D-thiogalactoside (IPTG). Selain itu untuk memperoleh protein rekombinan dalam jumlah yang tinggi perlu dilakukan optimasi kondisi ekspresi Bst DNA polimerase. Suhu inkubasi setelah induksi konsentrasi akhir IPTG waktu inkubasi setelah induksi serta nilai OD600 awal sebelum induksi merupakan kondisi ekspresi Bst DNA polimerase yang dioptimasi pada penelitian ini. Rekombinan diuji ekspresinya dengan Sodium Dodecyl Sulphate ndash Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) kemudian pita protein dikuantifikasi menggunakan perangkat lunak ImageJ untuk mengetahui jumlah protein rekombinan. Hasil penelitian menunjukkan jumlah protein rekombinan tertinggi diperoleh dengan kondisi ekspresi pada suhu 37 oC selama 6 jam dengan konsentrasi akhir IPTG yang ditambahkan saat OD600 1.1 dalam kultur sebesar 1 mM. Setelah dilakukan optimasi jumlah protein rekombinan mengalami peningkatan sebanyak 2.6 kali lipat dibandingkan dengan sebelum dioptimasi.

Informasi Detail

DDC

Rs 572.838 ISM o

Prodi

Universitas Negeri Malang. Program Studi Kimia, 2021.

Deskripsi Fisik

x, 59 lembar: ill. ,tab. ; 30 cm

Bahasa

Indonesia

No Reg

04303/KI/22

Edisi

Skripsi (Sarjana)--Universitas Negeri Malang. 2021/2022

Subjek

1. BIOMOLEKULER - DETEKSI VIRUS COVID 19
2. BIOMOLECULAR - COVID 19 VIRUS DETECTION

Pembimbing

1. Eli Hendrik Sanjaya; 2. Fina Amreta Laksmi

Lampiran Berkas