Skripsi

Transformasi dan kuantifikasi plasmid pgapza untuk produksi protein l1-hpv45 pada sistem ekspresi methanol-free pichia pastoris / Astrid Shabrina Kesumareswari

Abstrak
Kanker serviks dapat dicegah dengan melakukan vaksinasi terhadap HPV. Mahalnya harga vaksin menyebabkan vaksinasi HPV belum merata sehingga diperlukan upaya untuk mengembangkan vaksin HPV yang lebih murah. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan transforman gen L1-HPV45 ke P. pastoris dan menghitung copy number-nya yag merupakan salah satu tahapan dalam pengembangan vaksin dengan metode isolasi plasmid L1-pGAPZA dari E. coli verifikasi dengan PCR koloni restriksi vektor ekspresi L1-pGAPZA dengan PagI transformasi ke P. pastoris perhitungan copy-number dengan ImageJ sekuensing Sanger dan ekspresi protein L1-HPV45. Hasil isolasi plasmid tergolong murni tanpa kontaminan protein dan RNA. Sebanyak lima transforman tumbuh diseleksi bertingkat dengan YPD mengandung zeosin 100 500 1000 dan 2000 micro g/ml untuk mendapatkan multi-copy number. Hasilnya transforman hanya memiliki 1-4 copies. Hasil sekuensing Sanger menunjukkan kemiripan antara nukleotida gen sintetik dengan contig sebesar 99 67% untuk K1 100 dan sebesar 99 27% untuk K1 2000. Growth curve ekspresi K1 100 menunjukkan pada jam 0-12 terjadi fase adaptasi jam 12-48 terjadi fase logaritmik jam 48-84 terjadi fase stasioner dan pada jam 84-96 menunjukkan fase kematian. Perhitungan copy number yang lebih akurat dengan qPCR disarankan untuk penelitian lanjutan.

Informasi Detail

DDC

SKRIPSI DIGITAL

Prodi

Universitas Negeri Malang. Program Studi Biologi, 2019.

Deskripsi Fisik

ix, 17 lembar. : ilus.

Bahasa

Indonesia

No Reg

3332/RS/23

Edisi

Skripsi (Sarjana)--Universitas Negeri Malang. 2019

Subjek

1. VAKSIN, PENGEMBANGAN - SISTEM EKSKRESI - HPV
2. VACCINES, DEVELOPMENT - EXCRETION SYSTEM - HPV

Pembimbing

1. Dr. Sri Rahayu Lestari, M.si

Lampiran Berkas