Skripsi
Optimasi prosedur isolasi protein otot soleus tikus / Dahlia Normala
Abstrak
Protein banyak dikaji oleh peneliti untuk keperluan penemuan terapi atau obat untuk penyakit tertentu seperti Glucose transporter 4 (GLUT4) dan Insulin receptor substrate 1 (IRS-1) yang berperan dalam pengelolaan gula darah. Dalam prosesnya protein perlu diisolasi dengan metode yang paling optimal. Penelitian ini bertujuan untuk menyajikan metode isolasi protein otot soleus menggunakan nitrogen cair dan reagent TRIzol yang dioptimasi kelarutan pelet protein menggunakan empat macam lisis buffer. Pelet protein yang dilarutkan menggunakan lisis buffer 4 yang mengandung EDTA 20mM NaCl 140mM Tris 100mM Ph 8.8 dan SDS 5% terbukti dapat melarutkan pelet protein hasil isolasi reagent TRIzol setelah diinkubasi selama 18 jam pada suhu 50 C. Metode ini terbukti telah berhasil mengisolasi protein target dengan konsentrasi sebesar 16 564mg/mL dengan kemurnian 0 68 yang diukur menggunakan nanodrop. Selain itu pita protein target juga nampak pada uji SDS-PAGE yang kebenarannya dikonfirmasi dengan perhitungan Retardation factor dan visualisasi pada western blot. Dengan ini diharapkan hasil yang dilaporkan dapat menjadi dasar untuk keberhasilan melakukan ekspresi protein bagi para peneliti yang akan bekerja dalam penelitian yang melibatkan isolasi protein dari otot rangka.